In vitro модели для регенеративной медицины: от 2D к 3D

Преподаватели:
О.А. Григорьева, м.н.с. Института регенеративной медицины МГУ имени М.В. Ломоносова
Р.Ю. Еремичев, м.н.с. Института регенеративной медицины МГУ имени М.В. Ломоносова
Н.А. Александрушкина, лаборант-исследователь Института регенеративной медицины МГУ имени М.В. Ломоносова
Н.А. Басалова, лаборант-исследователь Института регенеративной медицины МГУ имени М.В. Ломоносова

Место проведения:
Медицинский научно-образовательный центр МГУ имени М.В. Ломоносова

Количество человек в группе: 6 человек

Продолжительность: 6 часов

Расписание:
10:00-12:00 Получение трехмерных конструкций из живых клеток
12:00-12:30 Перерыв
12:30-14:30 Визуализация и получение изображений 3D-конструкций
14:30-15:00 Перерыв
15:00 - 17:00 Принципы анализа изображений 3D-конструкций

Описание мастер-класса:
Клеточные линии, полученные из тканей человека и животных, давно являются одной из наиболее удобных и распространенных моделей для изучения закономерностей организации живого. Кроме того, культуры клеток широко используются для разработки и тестирования медицинских препаратов, а также для производства вакцин, рекомбинантных белков и других биологически активных веществ. Однако классическое культивирование клеток в 2D-формате, прикрепленными к поверхности культуральной посуды, приводит к изменению состояния клеток, что зачастую ограничивает возможность экстраполяции результатов, полученных в данной модели, на целый организм. Стремление преодолеть данные ограничения поставило исследователей перед необходимостью разработки принципиально новых in vitro клеточных моделей, в большей степени воспроизводящих живые системы. Одним из таких подходов стало создание и анализ трехмерных клеточных конструкций с использованием различных клеточных линий. Благодаря воспроизведению архитектуры ткани, химических и механических сигналов, 3D-конструкции позволяют получить in vitro клеточные модели более релевантные системам in vivo. При этом повышение сложности организации делает более сложным получение и интерпретацию результатов в данных системах. Незаменимым методом анализа объемных 3D-конструкций является конфокальная микроскопия, а также автоматизация процессов получения и обработки изображений.

Ожидаемые результаты: В серии мастер-классов мы познакомим слушателей с принципами работы с трехмерными клеточными конструкциями, начиная от их создания до статистического анализа изображений. В практической части мастер-класса 1 мы рассмотрим варианты трехмерных клеточных структур и способы их создания, попробуем самостоятельно собрать такую конструкцию в культуральном боксе с использованием клеточных линий. В практической части мастер-класса 2 мы обсудим возможности визуализации и получения изображения 3D-конструкции. Мы получим трехмерное изображение с помощью конфокального микроскопа Leica TCS SP5, а также узнаем о возможностях автоматизации процесса получения изображения на примере работы комплекса приборов Cytation и BioSpa. В практической части мастер-класса 3 будут обсуждены принципы анализа изображения, в том числе полученного с помощью конфокальной микроскопии. Мы продемонстрируем возможный алгоритм анализа на примере использования программы ImageJ (Fiji).